Количественное определение триптофана заключа­ется в измерении интенсивности синего окрашивания, возникающего при реакции его с парадиметиламинобенз- альдегидом. Оптическую плотность окрашенных раство­ров определяют на спектрофотометре СФ-4, или СФ 16, или фотоэлектроколориметре. При расчетах пользуются калибровочным графиком, построенным по химически чистому L-триптофану.

Методика определения следующая. 300 мг исследуемо­го образца, предварительно растертого до однородной массы, помещают в центрифужную пробирку и проводят гидролиз 2 мл 5 н. раствора NaOH в течение 2 ч при 60° С. После гидролиза содержимое центрифужных пробирок разбавляют 8 мл дистиллированной воды, перемешивают и центрифугируют при 7000 мин^-1 в течение 10 мин. За­тем 0,5 мл прозрачного центрифугата помещают в пробир­ку, содержащую 2,5 мл 0,5%-ного раствора n-диметилами- нобензальдегида и после перемешивания оставляют в темно­те на 30 мин. Затем добавляют 2,5 мл абсолютного спирта и две-три капли 0,2 н. раствора NaNO_z, пробирку встряхи­вают и оставляют еще на 30 мин. После этого содержимое пробирки фильтруют и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 620 нм в кюветах с рабочей длиной грани 10 мм. Контролем слу­жит смесь дистиллированной воды и 5 н. раствора гидро­ксида натрия в соотношении 4:1.

По найденной оптической плотности с помощью калиб­ровочного графика находят содержание триптофана в про­бе. Содержание его в объекте X, 10 ^-3%, вычисляют по урав­нению

Х = а • 100/р,

где а — содержание триптофана в пробе, мг; р—навеска исследуемого объекта во взятой для анализа пробе, г.

Реактивы. 1. 5 н. раствор гидроксида натрия. 2. ! 2,5%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида. 0,5 г ! реактива растворяют в 10%-ной НС1. Используют свеже­приготовленный раствор. 3. Абсолютный спирт. Смешивают 2 части 96% этилового спирта с 1 частью негашеной из­вести и оставляют на двое суток или кипятят несколько часов с обратным холодильником. Затем спирт отгоняют. 4. 0,2 н. раствор нитрита натрия (NaN0₂).