Критерием выбора температуры стерилизации служит величина активной кислотности продукта, поскольку к ней микроорганизмы проявляют высокую чувствительность (см. п. 5.3). По принятым в химии критериям все консервируемые пищевые продукты следует относить к кислым средам (рН менее 7). Исключение составляют некоторые натуральные рыбные и мясные консервы (табл. 16.2).
Несмотря на видовое разнообразие микрофлоры продукта перед стерилизацией, микробиологи установили свой критерий кислотности пищевых продуктов для разработки режимов стерилизации. Этот критерий основан на отношении к активной кислотности среды микроорганизма Clostridium botulinum.
Обязательным требованием эффективности процесса стерилизации консервов во всем мире является полное уничтожение возбудителей такого тяжелого заболевания, как ботулизм, так как примерно в 65 % случаев пищевых отравлений с летальным исходом причиной являются токсины Cl. botulinum. Режимы стерилизации должны обеспечить полную гибель вегетативных клеток и спор Cl. botulinum, а режимы субстерилизации («пастеризации» мясных консервов) - гибель только их вегетативных клеток, так как ограниченная для данных консервов температура хранения (0-5 °С) гарантирует невозможность развития их спор.
Cl. botulinum - токсигенный спороносный анаэроб. Вегетативные клетки в процессе жизнедеятельности продуцируют токсин - нервно-паралитический яд сильного действия, смертельная доза которого для человека составляет 10-7г. Долгое время считалось, что Cl. botulinum является сапрофитом и в организме человека развиваться не может. Считалось, что возбудители ботулизма способны развиваться только на неживых средах, к которым относятся все пищевые продукты, кроме живых органов растений - плодов, ягод, овощей. Однако в последнее время зарегистрированы случаи развития Cl. botulinum в истощенных организмах с ослабленным иммунитетом по типу токсикоинфекции.
Известны семь типов микроорганизмов: А, В, С, D, E, F, G. Только типы С и D не представляют опасности для человека. Человек особенно чувствителен к токсинам типов А и E. Для консервного производства наиболее опасны Cl. botulinum типов А, В и F, отличающиеся высокой термостойкостью.
Оптимум развития для Cl. botulinum типов А, В, С, D составляет 34-35 °С, для E и F - 28-30 °С. Максимальной для развития считается температура 50 °С. Вегетативная форма гибнет при температуре 80 °С за 15-30 мин. Чем меньше насыщенность воздуха водяными парами, тем выше термоустойчивость Cl. botulinum.
Минимальная температура развития для типов А и В, при которой накапливается токсин, составляет 12 °С. Другие типы обычно не образуют токсин при температурах ниже 5 °С. Не зарегистрировано ни одного случая токсинообразования при температурах ниже 3,3 °С. При холодильном хранении токсин не образуется, но и не разрушается. Он имеет белковую природу и разрушается при кипячении в течение 10-20 мин.
В сухих пищевых продуктах (активная кислотность воды aw <0,65) и в продуктах с промежуточной влажностью (aw = = 0,65-0,85) токсин не образуется, но в высушенном состоянии споры сохраняются десятилетиями. Не образуется токсин и в среде, где концентрация поваренной соли составляет 11 %. Копчение, вяление и соление пищевых продуктов не ослабляют токсин.
Споры устойчивы к низким температурам (до -190 °С), к нагреванию (выдерживают кипячение в течение 5 ч). Устойчивы к химическим веществам: в 20 %-ном растворе формалина гибнут через 24 ч, в 5 %-ном растворе фенола выдерживают до 1 сут и более. В этиловом спирте и 15 %-ном растворе соли споры сохраняют жизнеспособность до 2 мес. Умеренная тепловая обработка увеличивает вероятность развития Cl. botulinum, так как при этом из продукта удаляется воздух и создаются анаэробные условия. Кроме того, во время нагревания возможно уничтожение микробов-антагонистов (например, молочнокислых бактерий).
Тяжесть болезни и высокая летальность (60-85 %) привели к необходимости регистрации каждой вспышки заболевания и анализу. Зарегистрированы случаи заболевания в различной форме - пищевой, раневой, респираторной, детской, неспецифической (источник заболевания не был установлен).
Раневой ботулизм. Причиной зарегистрированного случая явилось накопление токсина при развитии Cl. botulinum в загрязненных землей ранах.
Детский ботулизм. В конце 70-х гг. прошлого века было зарегистрировано более 100 случаев заболевания у детей в возрасте от 29 дней до 8 мес. Предпосылкой явилось попадание в желудочно-кишечный тракт ботулинических спор с домашней пылью, почвой комнатных растений, с медом.
Респираторный ботулизм. В 1962 г. в ФРГ три научных сотрудника заболели в результате вдыхания пыли, содержащей токсин.
Классически ботулизм протекает, как пищевая интоксикация. Описание симптомов заболевания ботулизмом известно еще с ХVIII в. Инкубационный период заболевания составляет от 3 до 10 сут. Чем меньше период, тем тяжелее течение болезни. Начальные признаки болезни неспецифические: недомогание, общая слабость, головная боль. Могут быть тошнота, рвота, жжение в желудке, понос.
Позже появляются специфические симптомы - расстройство зрения, паралич мягкого нёба, языка, глотки, гортани, расстройство речи (вплоть до полной афонии), ослабление слуха. Нарушаются жевание и глотание, моторная функция кишечника (запор и метеоризм), двигательные функции. Температура тела нормальная или ниже нормы и не соответствует учащенному пульсу. На последней стадии болезни - паралич и остановка дыхания и сердечной деятельности. Смерть наступает при ясном сознании. Продолжительность болезни - от 4 до 8 сут, реже 3-4 нед. Лечение успешно при своевременном введении специальной сыворотки.
Микроорганизмы Cl. botulinum обладают протеолитической активностью, могут разлагать растительные и животные белки с образованием газов и появлением бомбажа. Поэтому бомбажные банки рассматриваются как возможный источник ботулинического токсина. Продукт может размягчаться, появляется посторонний запах. Однако нередки случаи, когда токсин обнаруживали в продуктах, не имеющих внешних признаков порчи.
В консервах могут развиваться гнилостные анаэробы с большей термоустойчивостью, чем Cl. botulinum. К таким микроорганизмам относятся Cl. sporogenes, Cl. perfringens, Cl. putrificum. Однако признаки порчи продуктов в данном случае явно выражены, и это служит гарантией против употребления их в пищу. К тому же продукты жизнедеятельности данных клостридий не слишком токсичны. Известны микроорганизмы более токсичные, чем Cl. botulinum, но они вызывают явную порчу или нетермостойки. Вот почему уничтожение спор именно возбудителей ботулизма при стерилизации консервов считается во всем мире обязательным. Поэтому и классификация пищевых консервированных продуктов основана на реакции именно Cl. botulinum на активную кислотность среды.
Долгое время считалось, что эндоспоры бактерий родов Bacillus и Clostridium не могут прорастать в пищевых продуктах при рН < 4,5. Однако в 1982 г. появились сообщения об образовании токсина штаммами Cl. botulinum типа А и В в среде, содержащей 3-5,5 % белка при рН 4,2-4,4. Было высказано предположение, что в среде, содержащей белок в количестве 3 % и выше, внутри матриц агрегатированного белка создается микросреда с более высоким значением рН, что делает возможным развитие Cl. botulinum.
В настоящее время принято считать, что при рН менее 3,7 Cl. botulinum не развивается, а при рН 3,7-4,2 развивается медленно. Значение имеет и природа кислоты (обеспложивающая активность). Максимальная величина рН, подавляющая развитие Cl. botulinum, для различных кислот будет разной:
- для соляной кислоты - 3,67-4,46; для винной - 4,11-4,46;
- для яблочной - 4,03-4,44; для уксусной - 4,54-4,84;
- для молочной - 4,09; для лимонной - 4,00-4,85.
Таким образом, выбор температуры стерилизации зависит от активной кислотности продукта, определяющей возможность развития Cl. botulinum. Малокислотные продукты с рН > 4,2 стерилизуют при температуре выше 100 °С, чаще всего при 112-120 °С. Кроме Cl. botulinum в таких продуктах могут развиваться и другие термостойкие спорообразующие микроорганизмы.
Кислотные продукты с рН<4,2, в которых развиваются нетермостойкие микроорганизмы, стерилизуют (пастеризуют) при температурах не выше 100 °С. Но есть и исключения. Так, томатный сок (рН колеблется в пределах 4,0-4,5) оказался средой, в которой при определенных условиях развивается с образованием токсина d. botulinum. Начиная с 1973 года стерилизация консервов «Томатный сок» производится при 120 °С.
По невыясненным причинам консервы из абрикосов, персиков и груш (сок, пюре), рН которых может составлять 3,8-3,9 (т.е. среда с высокой кислотностью), также оказались подходящим продуктом для развития возбудителей ботулизма. Поэтому такие консервы, имеющие рН выше 3,8, рекомендуют стерилизовать при 110 °С, в крайнем случае, при 100 °С, но значительно дольше, чем в том случае, если их рН ниже 3,8.
В то же время концентрированные томатопродукты, рН которых значительно выше 4,2 и которые следовало бы отнести к первой группе, принято стерилизовать при 100 °С, так как возбудители ботулизма и другие анаэробы в данных продуктах не развиваются. Наверное, это связано с повышенным содержанием сухих веществ. Тормозящее влияние на развитие гнилостной микрофлоры в томатном пюре и томатной пасте, возможно, оказывает и недиссоциированная часть кислотных молекул: общая кислотность концентрированных томатопродуктов высока - около 2-2,5 %, что значительно выше, чем кислотность некоторых фруктовых консервов.
Наконец, более жесткий режим, чем этого можно было ожидать, исходя из значения активной кислотности, практикуется при стерилизации салатов из свежих овощей (капусты, сладкого перца, томатов, моркови, лука, свеклы); рН салатов с помощью уксусной кислоты устанавливается в диапазоне 3,7-4,2 (кислые продукты), несмотря на это салаты стерилизуют при температурах 110 °С. По-видимому, в данном случае влияние оказывает тот факт, что сами компоненты консервов являются малокислотными, а внесенная при закладке уксусная кислота из-за отсутствия жидкой фазы (в этих консервах мало заливки или ее нет) не может во время стерилизации равномерно распределиться во всем объеме продукта. Возможно, значение имеет также наличие жира в данных консервах.
Таким образом, критерием выбора температуры стерилизации служит величина активной кислотности продукта. По ГОСТ 4.458-86 «Система показателей качества продукции. Консервы овощные, плодовые и ягодные. Номенклатура показателей» показатель рН отнесен к показателям безопасности консервов.