Лептоспиры вызывают лептоспироз — инфекционную природно-очаговую болезнь животных и человека, характеризующуюся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобулинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно. Возбудитель был открыт Инад и Идо в 1914–1915 гг.

Лептоспиры относятся к семейству Leptospiraceae (leptos — тонкий, speira — виток, спираль) и роду Leptospira, который включает два вида: патогенный — L.interrogans и сапрофитический — L. вiflexa. Патогенный вид представлен 183 сероварами, которые по составу антигенов объединены в 25 серогрупп.

В инфекционной патологии животных наибольшее значение имеют серогруппы: Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, Grippotyphosa, Icterohaemorragiae, Canicola.

Морфология. Лептоспиры — спиралевидные бактерии диаметром 0,1–0,25 и длиной 6–30 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1–2 вторичных, придающих клетке форму букв G, S, С. В темном поле они имеют вид тонких серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность. Главный тип движения — вращательно-поступательный. Спор не образуют. Грамотрицательны, плохо окрашиваются анилиновыми красителями; по Романовскому — Гимза окрашиваются в красный

цвет, но фиксация резко изменяет их морфологию; используется также метод импрегнации серебром по Левадити.

Культивирование проводят в аэробных условиях при тем- пературе 28–30°С на специальных средах, содержащих 5–10% сыворотки крови кролика или овцы, дистиллированную, водо- проводную воду или фосфатный буфер (рН 7,2–7,6). К ним от- носятся следующие среды: Уленгута, Терских, Ферворта — Вольфа, Любашенко и др. Размножение лептоспир обычно на- чинается через 7–20 дней, иногда 1–2 мес. Внешне среда при этом не изменяется, и появление роста контролируют микро- скопией препарата «раздавленная капля» в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) лептоспиры образуют коло- нии S-, O-и R-форм. S-форма колоний — типичная для виру- лентных штаммов, ее колонии прозрачные, в виде диска с ров- ным краем.

Биохимические свойства изучены недостаточно. Фермен- тация углеводов не доказана; были обнаружены каталаза, ок- сидаза, липаза и др.

Устойчивость. В воде открытых водоемов патогенные леп- тоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более. Будучи типичны- ми гидрофилами, в почве, перенасыщенной водой, выживают до 280 дней, в свежем молоке — 8–24 ч; в замороженном мясе погибают через 10 дней. Чувствительны к воздействию пова- ренной соли; в засоленном (4,8% NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 дней; в гипертоническом растворе по- варенной соли (2,8%) — через 15 мин.

При кипячении погибают моментально, при 56–58°С — в те- чение 25–30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воз- действием прямого солнечного света. 0,1%-ный раствор соля- ной кислоты, 0,5%-ный раствор фенола инактивируют лепто- спиры за 20 мин.

Патогенность. К лептоспирозу наиболее восприимчивы крупный рогатый скот (серогруппы помона и гебдомадис), сви- ньи (серогруппы помона и тарассови), лисицы, песцы; менее восприимчивы лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, оле- ни, ослы, собаки, кошки, куры. Лептоспирозом болеет и чело- век. Основными носителями данного заболевания в природных очагах являются серые и водяные полевки, серые крысы, домо- вые мыши и землеройки.

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны золотистые хомячки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат: кровь (лучше брать на 3–5-й день болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, почка, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирается не позже 2 ч после гибели животного. Моча собирается при естественном мочеиспускании и в летнее время исследуется в течение 3 ч.

Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровь, тканевую суспензию. Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры подвижны и имеют форму прямой или S-образно изогнутой серебристо-белой нити с загнутыми в виде крючков концами. Лептоспиры также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити.

Выделение культур. Материал засевают по 1–3 капли одновременно в 3–5 пробирок со специальной питательной средой, инкубируют при температуре 28–30°С в течение 3 мес. Лептоспиры начинают размножаться через 7–20 дней, иногда через 1–2 мес., очень редко — через 3 мес. Получить культуры лептоспир удается не всегда.

Биологическая проба. Метод более эффективный, чем бактериологический; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения вирулентности и дифференциации от сапрофитов.

Серологическое исследование. Для серологической диагностики лептоспироза используют РМА (реакция микроагглютинации) и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5–7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7–10 дней. Необходимо помнить, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохраняться до двух и более лет.

Лептоспиры можно идентифицировать на уровне вида, серогруппы и серовара при помощи ПЦР.

Иммунитет и средства специфической профилактики. После переболевания у животных формируется длительный и напряженный иммунитет.

Для активной иммунизации применяют депонированную поливалентную вакцину ВГНКИ против лептоспироза животных.

Для пассивной иммунизации и лечения больных животных используют гипериммунную сыворотку против лептоспироза.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ЛИСТЕРИОЗА

Возбудителем листериоза является Listeria monocytogenes, который вызывает болезнь у животных многих видов и человека. Заболевание характеризуется септическими явлениями, поражением центральной нервной системы и мочеполового аппарата.

Морфология. L. monocytogenes — полиморфная палочка с закругленными концами длиной 0,5–3,0 мкм и шириной 0,3– 0,5 мкм; подвижная, грамположительная. В мазках палочки располагаются поодиночно или под углом в виде римской цифры V. Спор и капсул не образуют.

Культивирование. Листерии — факультативные аэробы. Оптимум температурного роста на питательных средах с рН 7,2– 7,4 составляет 36–38°С, однако они могут расти при температуре от 4 до 45°С, что используют при дифференциации. На МПА образуют мелкие росинчатые колонии. В МПБ вызывают незначительное помутнение среды с образованием слизистого осадка. Листерии хорошо растут на печеночных средах с добавлением 1% глюкозы и 2–3% глицерина. В качестве элективных сред используют МПБ с 0,05% теллурита калия или 0,01–0,02% теллурита калия в водном растворе глицерина и растворе полимиксина. На кровяном агаре вокруг колоний образуется зона гемолиза.

Биохимические свойства. Листерии ферментируют с образованием кислоты без газа глюкозу, левулезу, рамнозу и салицин; замедленно — сахарозу, крахмал и глицерин; некоторые культуры разлагают лактозу и мальтозу. Не ферментируют арабинозу, дульцит, инулин и сорбит; не образуют индол и сероводород; не разжижают желатин; не восстанавливают нитраты в нитриты; дают положительную пробу на каталазу.

Устойчивость. Листерии устойчивы во внешней среде. В почве они сохраняют жизнеспособность от 6 до 11 мес.; в воде — в течение года и более; в навозе — до 7 мес., в силосе — более года; в мясе — до года. В бульонных культурах листерии погибают при 100°С через 10–15 мин, при 55°С — через 1 ч; 2,5%-ный раствор формальдегида обезвреживает их через 20 мин, а 2,5%-ный раствор гидроксид натрия и раствор хлорной извести с содержанием 2% активного хлора — через 20 мин.

Патогенность. Листерии патогенны для многих видов млекопитающих, в том числе грызунов, хищных и копытных, а также для птиц. Из домашних животных листериоз зарегистрирован у мелкого и крупного рогатого скота, лошадей, кроликов, кур, уток и др. Листериозом болеет также человек, заражение происходит при контакте с больными животными, при употреблении продуктов, приготовленных из мяса больных животных, чаще болеют работники животноводства (свинарки, доярки). Бактерии проникают в организм человека через поврежденные слизистые, кожу и желудочно-кишечный тракт.

Патогенез. В зависимости от места внедрения возбудитель распространяется в организме различными путями: гематогенным, лимфогенным и нейрогенным. У беременных животных листерии вызывают гибель плодов. Патогенное действие листерии обусловливается за счет выделения экзо-и эндотоксинов.

Бактериологическая диагностика. Диагноз ставят на основании выделения культуры листерий из патологического материала. Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных или голову (головной мозг), паренхиматозные органы, абортированный плод и его оболочку. Для прижизненной диагностики направляют кровь или сыворотку крови, а также истечения из половых органов абортировавших самок, молоко из пораженных долей вымени.

Для микроскопического исследования из патологического материала готовят мазки-отпечатки, применяют окраску по Граму и метод флюоресцирующих антител.

Для бактериологического исследования из паренхиматозных органов и головного мозга делают обильные посевы на селективные среды, а также на кровяной агар. Рекомендуется часть материала сохранять в холодильнике в течение 30 сут. для проведения повторных исследований при отрицательном результате первичного посева.

Посевы инкубируют в термостате при 37°С, ежедневно просматривая в первые 3–4 дня, при отсутствии роста наблюдение продолжают до 2 нед.

Выделенные культуры исследуют на подвижность, изучают их ферментативные свойства на средах Гисса, ставят пробу на каталазу. Проводят дифференциацию от возбудителя рожи свиней, делая высев на среду с метилротом или нейтральротом в смеси с метиленовым синим: листерии обесцвечивают среды, а возбудитель рожи свиней — нет. Ставят капельную РА на стекле с поливалентной и серогрупповой листериозной агглютинирующей сывороткой.

Биологическая проба. Наиболее чувствительны к данному заболеванию белые мыши и кролики. Заражают внутрибрюшинно или внутривенно в дозе 0,3–0,5 мл суточной бульонной культуры.

Специфические свойства листерий проверяют также с помощью конъюнктивальной пробы на морских свинках или кожной пробы на морских свинках или кроликах.

Конъюнктивальная проба. На конъюнктиву глаза морской свинки наносят две капли испытуемой бульонной культуры с последующим легким массажем век ватным тампоном. На 2– 4 сут. вирулентные листерии вызывают гнойный кератоконъюнктивит. При положительной кожной пробе через 48 ч развивается воспаление с последующим некрозом участка кожи и образованием струпа. Для типирования культур используют также листериозные бактериофаги.

Серологическая диагностика. Сыворотку животных исследуют в РА и РСК. РА признается положительной при наличии агглютинации с оценкой не менее чем на два креста в разведениях сыворотки 1:200 для овец, коз и свиней, для лошадей и крупного рогатого скота — 1:400, для кроликов — 1:50.

Для диагностики листериоза с помощью РНГА используют диагностикум Омского НИИ природно-очаговых болезней.

Иммунитет и средства специфической профилактики. Переболевшие животные приобретают иммунитет. С профилактической целью применяют сухую живую вакцину из штамма АУФ. После однократного ее введения у крупного рогатого скота, свиней и овец создается иммунитет продолжительностью до года, у кроликов и норок — до 6 мес.

Дифференциальные признаки, по которым проводят идентификацию возбудителей рожи свиней и листериоза, представлены в табл. 2.

Листерии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда (окситетрациклин, хлортетрациклин), ампициллину.

ВОЗБУДИТЕЛЬ

РОЖИ СВИНЕЙ

Возбудитель рожи свиней — бактерия Erysipelothrix rhusiopathiae. Вызывает инфекционную болезнь, характеризующуюся при остром течении септицемией и воспалительной эритемой кожи, при хроническом — эндокардитом и артритами. Им болеют животные преимущественно в возрасте 3–12 мес.

Морфология. Возбудитель — тонкая прямая или слегка изогнутая мелкая палочка размером 1,5–2´0,2–0,3 мкм, но в старых культурах и патматериале обнаруживают и нитевидные формы. Бактерии неподвижны. Споры и капсулу не образуют. Грамположительные, хорошо окрашиваются обычными анилиновыми красителями.

Культивирование. Растет в аэробных и анаэробных условиях, лучше в атмосфере с пониженным давлением кислорода, содержащей 5–10% СО2 (микроаэрофил). Возбудитель рожи культивируют в МПБ, на МПА, МПЖ, бульоне Хоттингера, элективной среде Сент-Иваньи (агаровая среда с 0,1% кристаллвиолета

и 1% азида натрия). Оптимальные условия для роста: температура 36–37°С, рН 7,2–7,6. МПБ не мутнеет, и только при встряхивании пробирки появляются муаровые волны. Через 48–72 ч на дне пробирки образуется осадок, который при встряхивании поднимается в виде облачка.

На МПА возбудитель растет в виде мелких росинчатых колоний (S-форма), видимых только под определенным углом освещения. S-формы выделяют при остром течении болезни; при хроническом могут появиться колонии R-формы — крупные, с неровной шероховатой поверхностью и отходящими от края корнеобразными отростками.

В столбике желатина при посеве уколом через 6–10 сут. от серовато-белого стержня отходят горизонтальные нежные отростки, желатин не разжижается.

Биохимические свойства. Бактерии рожи свиней выделяют сероводород, не образуют индол и каталазу; большинство штаммов разлагают с образованием кислоты без газа лактозу, глюкозу, галактозу, левулезу; редко — ксилозу, арабинозу, мальтозу и рамнозу; не ферментируют сахарозу, маннит и салицин.

Устойчивость. Возбудитель обладает высокой устойчивостью во внешней среде. В трупах животных может сохраняться, а иногда и размножаться в течение 3–4 мес. В почвах, богатых органическими веществами, сохраняется 7–8 мес., в навозной жиже — до 20 сут., в речной воде при 4°С — 75–86, в моче свиней — 113–145, в фекалиях — 38–75 сут. В засоленной свинине бактерии выживают до 6 мес., в копченых продуктах — до 3 мес. Прямые солнечные лучи убивают через 10–12 сут., высушивание при рассеянном свете — через 3–4 нед.; нагревание при 50°С — через 15 мин, при 70°С — через 5 мин.

Возбудитель рожи свиней чувствителен к антибиотикам и дезинфектантам. Особенно эффективны 2–3%-ные растворы гидроксида натрия, 20%-ная взвесь свежегашеной извести, 2%-ный раствор формальдегида, 5%-ный горячий раствор кальцинированной соды.

Патогенность. Восприимчивы к бактериям свиньи, особенно в возрасте от 3 мес. до 1 года. Спорадические случаи болезни отмечены у лошадей, крупного рогатого скота, овец, оленей, собак. Возбудитель рожи свиней патогенен и для человека. Восприимчивы дельфины, многие виды грызунов и насекомоядных, утки и гуси, а также куры и индейки. Бактерии можно обнаружить на поверхности тела, в кишечнике и даже мышцах некоторых видов морских и пресноводных рыб, для которых они не патогенны.

К экспериментальному заражению восприимчивы белые мыши и голуби, они гибнут через 2–5 сут. Менее чувствитель# ны кролики, которые после внутривенного заражения гибнут на 3–6 сут.

Лабораторная диагностика. Для исследования в лаборато# рию направляют труп животного целиком или сердце, печень, селезенку, почку и трубчатую кость. При подозрении на хрони# ческое течение — обязательно сердце. Выявление возбудителя рожи проводят с использованием микроскопического, бактерио# логического и серологического (РА, РИФ) методов.

Микроскопия. Мазки#отпечатки из органов окрашивают по Граму. В положительных случаях в мазках обнаруживают грам# положительные палочки, расположенные одиночно, попарно или скоплениями, при хроническом течении появляются длин# ные нити.

Посев на питательные среды. Высевы делают из крови сердца с пораженными клапанами, почки, селезенки, печени, костного мозга в МПБ или бульон Хоттингера и на МПА. Посе# вы инкубируют при 36–37°С в течение 18–24 ч, а при отсутст# вии роста еще сутки. Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, культуральным и био# химическим свойствам, а также в РА на предметном стекле с диагностической противорожистой сывороткой. В положитель# ном случае агглютинация наступает быстро, агглютинат имеет вид плотных мелких комочков.

К возбудителю рожи относят культуру, выделяющую серо# водород, не образующую каталазу, разлагающую глюкозу, лак# тозу (без газа) и не ферментирующую сахарозу и маннит, даю# щую положительную РА со специфической сывороткой.

Для обнаружения рожистых бактерий в патологическом материале, а также идентификации выделенных культур ис# пользуют метод флюоресцирующих антител.

Биологическая проба. Белых мышей или голубей заражают суспензией (1:10) из органов или бульонной культурой; мышей заражают подкожно (0,1–0,2 мл), голубей — внутримышечно

(0,2–0,3 мл). Мыши и голуби погибают на 2–4 сут. Из органов павших животных делают посев в МПБ и на МПА для выделе- ния чистой культуры возбудителя.

Дифференциальный диагноз. Бактерию рожи свиней необ- ходимо дифференцировать от возбудителя листериоза, а также возбудителя мышиной септицемии (Baс. murisepticum), кото- рый непатогенен для голубей, ферментирует сахарозу, не дает РА со специфической рожистой сывороткой.

Иммунитет и средства специфической профилактики. Пе- реболевшие свиньи приобретают стойкий и длительный им- мунитет.

В настоящее время у нас в стране применяют концентриро- ванную гидроокисьалюминиевую формолвакцину и вакцину против рожи свиней из штамма ВР-2. Поствакцинальный ак- тивный иммунитет продолжается в среднем 4–6 мес., пассив- ный — до 2 нед.

Для пассивной профилактики и лечения больных живот- ных используют гипериммунную сыворотку. Положительный эффект при лечении оказывают антибиотики (пенициллин, стрептомицин, окситетрациклин, эритромицин и др.), особен- но в сочетании с противорожистой гипериммунной сывороткой.