ТЕМА 1 0
Культуральные свойства микроорганизмов
Цель занятия: ознакомить студентов с методами изучения
культуральных свойств бактерий на плотных и жидких питательных средах.
Материальное обеспечение: набор демонстрационных посе
вов на МПА и МПБ с различными культуральными признаками; для студентов пробирки со скошенным МПА и МПБ для индивидуального пересева изолированных колоний S. aureus и E. coli, выросших на чашках Петри (с прошлого занятия); МПА в трех чашках Петри, расчерченных на сектора для посева-отпечатка поверхности пальца каждого студента; микроскопы, бактериологические петли, спиртовки, набор красок для окраски по Граму, предметные стекла, иммерсионное масло; таблица «Культуральные свойства бактерий на плотных и жидких питательных средах».
Культуральные свойства микроорганизмов — это характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах, изучают для определения вида микроорганизмов.
Культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах.
В благоприятных условиях в результате размножения одной микробной клетки на поверхности питательной среды образуются скопления микробной массы — колонии. Разные микроорганизмы в зависимости от вида образуют различные колонии, поверхностные и глубинные. Чаще культуральные
свойства изучают у суточной культуры, но некоторые виды бактерий образуют видимые колонии только через 10–14 дней. Колонии изучают визуально или при помощи лупы в проходящем и падающем свете, при этом учитывают следующие культуральные признаки:
- величину колоний (различают мелкие, точечные — 1 мм,
средние — 2–4 мм и крупные — более 5–6 мм в диаметре,
при этом быстро растущие колонии образуют крупные колонии, а медленно — мелкие);
- форма колоний (круглые, правильной формы, в научной
литературе их называют S-формы; колонии неправильной
формы, амебовидные, корневидные, розеткообразные —
R-формы);
- край колоний (гладкий, волнистый, бахромчатый, складчатый, изрезанный, зубчатый, в виде лопастей и т. д.);
- профиль колоний — плоские, выпуклые, куполообразной
формы, конусообразные (в разрезе имеют форму треугольника), колонии со вдавленным центром;
- поверхность (гладкая, блестящая, морщинистая, радиально изрезанная, кратерная);
- степень прозрачности (росинчатые, прозрачные, мутные);
- наличие пигмента проявляется особенно интенсивно при
солнечном освещении (желтые, красные, белые, прозрачные, в большинстве своем бесцветные, которые чаще обозначают как серо-белые);
- консистенция колоний определяется прикосновением бактериологической петли; она может быть слизистая, тягучая, зернистая, плотная и вросшая в агар; сухая и кожистая — характерна для бактерий, образующих споры;
- форму изолированных анаэробных колоний изучают в глубине агара; они могут быть в виде диска, комочка ваты, снежинки и т. д.
Колонии некоторых видов микроорганизмов издают характерный специфический запах (например, вульгарный протей, возбудитель столбняка), колонии других видов врастают в толщу питательной среды и иногда окрашивают его.
Культуральные свойства бактерий в некоторой степени зависят и от их подвижности. Так, P. vulgaris образует ползущие по всей поверхности кружевные колонии, наблюдается так называемый «феномен роения», а его неподвижный вариант образует небольшие четко оформленные колонии.
Культуральные свойства бактерий в жидких питательных средах.
Стерильный МПБ прозрачный, а после посева и размножения микроорганизмов бульон изменяется, появляются следующие признаки: § помутнение (умеренное, обильное или в виде нежной опалесценции); § поверхностный рост характерен для аэробов, иногда он может быть по краю мениска в виде пристеночного кольца,
которое выражено слабо или интенсивно, бывает прочным
или легко смывающимся при встряхивании пробирки; в некоторых случаях бульон остается прозрачным, а на внутренней стенке пробирки появляются зерна, хлопья и даже
структуры в виде сталактитов; § поверхностный рост бактерий в бульоне может проявиться
появлением пленки различной толщины и консистенции,
например у возбудителей туберкулеза, в зависимости от вида
бывает нежная пленка, сухая морщинистая пленка, мощная слизистая пленка, а некоторые бактерии образуют кожистую пленку; § наличие осадка (незначительное, среднее, большое количество); § характер осадка на дне пробирки изучают при легком встряхивании в проходящем свете; он может быть хлопьевидный
или слизистый, который при встряхивании поднимается в
виде слизистой косички или разбивается в равномерную
муть, при этом крошковидный осадок чаще характерен для
бактерий, образующих цепочки; § некоторые бактерии образуют пигмент, который окрашивает питательную среду в желтый, сине-зеленый или красный цвет, в зависимости от вида бактерий.
План работы.
1. Изучить культуральные свойства бактерий, выросших на МПА после посева методом Дригальского. Обратить внимание на изолированные колонии, имеющие S-и R-формы.
2. Изучить культуральные свойства колоний золотистого стафилококка. Приготовить из них препараты, окрасить по Граму, определить тинкториальные свойства золотистого стафилококка, убедиться в однородности культуры.
3. Изучить культуральные свойства бактерий, выросших на агаре Эндо. Обратить внимание на красные колонии с металлическим блеском. Приготовить из них препараты, окрасить по Граму, определить тинкториальные свойства кишечной палочки, убедиться в однородности культуры.
4. Расчертить чашку Петри с МПА на сектора с номерами, в каждом секторе студент должен сделать посев-отпечаток поверхности пальца (осторожно, чтобы не раздавить агар), чашки поставить в термостат.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. С какой целью изучают культуральные свойства микроорганизмов?
2. Опишите культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах.
3. Опишите культуральные свойства бактерий на жидких питательных средах.
4. Назовите комплекс признаков, по которым определяют вид бактерий.