4.4.1 Приготовление реактивов для окраски по Граму

4.4.1.1 Приготовление насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового

10 г кристаллического фиолетового растворяют в 100 см³ этилового спирта.

4.4.1.2  Приготовление водно-спиртового раствора кристаллического фиолето­вого

1 см³ насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового по 4.4.1.1 растворяют в 10 см³ дистиллированной воды.

4.4.1.3 Приготовление раствора Люголя

2 г йодида калия растворяют в 5-10 см³ дистиллированной воды, затем прибав­ляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его рас­творения. Затем приливают остальное количество дистиллированной воды. Для при­готовления раствора используют 300 см³ дистиллированной воды.

4.4.1.4 Приготовление карболового раствора фуксина Циля

1 г основного кристаллического фуксина растирают в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина Во время растирания небольшими порциями прибавляют 96 % этиловый спирт в количестве 10 см³. После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном по­мешивании 100 см³ дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля очень стойкий и может храниться долгое время в посуде из темного стекла с притертой пробкой.

4.4.1.5 Приготовление водно-спиртового раствора фуксина (раствора Пфейфера)

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды. Раствор очень нестойкий, поэтому его готовят непосредственно перед исполь­зованием.

4.4.2 Приготовление реактивов из метиленового голубого

4.4.2.1 Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого для окрашивания микропрепаратов

10 г метиленового голубого смешивают со 100 см³ 96 % раствора этилового спирта. Раствор ставят в термостат при температуре (37±1) °С на 24 ч, затем фильтруют в термостате при той же температуре.

Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37±1) °С не более 3 мес.

4.4.2.2 Приготовление краски для препаратов

К 30 см³ основного спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100 см³ дистиллированной воды и 1 см³ раствора гидроокиси калия с массовой кон­центрацией 10 г/дм³.

4.4.3 Приготовление раствора резазурина для постановки редуктазной пробы и определения ингибирующих веществ

Основной раствор резазурино-натриевой соли готовят следующим образом: 0,1 г резазурино-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ и доводят до метки прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной во­дой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора не более 30 сут при температуре 8-10 °С.

Основной раствор резазурино-натриевой соли используется для приготовле­ния рабочего раствора для постановки редуктазной пробы и при определении инги­бирующих веществ.

Рабочий раствор резазурино-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до (25±2) °С дистиллированной водой в со­отношении 1:2,5 (например, к 10 см³ основного раствора прибавляют 25 см³ воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе - 0,014 %.

Хранят рабочий раствор не более 3 сут при температуре 0-5 °С.

Основной и рабочий растворы хранят в светонепроницаемой посуде.