Тесты на каталазу и оксидазу проводят при идентификации микроорга­низмов, в частности при контроле санитарно-гигиенического состояния воды.

6.3.1 Определение каталазной активности микроорганизмов

Сущность метода

Метод основан на способности каталазы, продуцируемой некоторыми микро­организмами при росте на питательной среде, разлагать перекись водорода с выде­лением пузырьков газа.

Проведение анализа

Испытания проводят с охлажденной до комнатной температуры культурой, не допуская соприкосновения клеток с нагретой поверхностью и применяя обезжирен­ные стерильные пробирки, предметные стекла, пипетки.

Определение каталазной активности микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах, проводят следующим образом. На колонию микроорганизмов, взятую с поверхности питательной среды или извлеченную из нее и помещенную на предметное стекло, после выдержки на воздухе в течение 30 мин пипеткой наносят каплю 3 % раствора перекиси водорода.

Определение каталазной активности микроорганизмов, выросших на жидких и полужидких питательных средах, проводят следующим образом. Из посевов отби­рают 2-3 см³ культуральной жидкости, переносят ее в пробирку и нейтрализуют рас­твором гидроокиси натрия или соляной кислоты.

1-2 капли нейтрализованной культуральной жидкости пипеткой переносят на предметное стекло и после выдержки на воздухе в течение 30 мин добавляют к ней каплю 3 % раствора перекиси водорода.

Если в посевах обнаружены газообразующие микроорганизмы, то при опреде­лении их каталазной активности ставят контрольную пробу аналогично пробе на каталазу но без добавления лерекиси водорода. В данном случае газообразующие микроорганизмы относят к каталазоположительным при отсутствии пузырьков газа в контрольной пробе или при явно повышенном газообразовании в пробе с перекисью водорода по сравнению с контрольной пробой.

Обработка результатов

При появлении на стекле пзырьков газа через 30-60 с считают, что они образовались в результате разложения перекиси водорода каталазой, образуемой микроорганизмами ( Приложение Г).

6.3.2 Определение оксидазной активности микроорганизмов

Сущность метода

Метод основан на способности оксидазы, продуцируемой некоторыми микро­организмами при росте на питательной среде, изменять цвет индикатора.

Подготовка к проведению анализа

Реактивы для оксидазного теста

Вариант 1

Используют 1 % водный раствор тетраметил-п-фенилендиамингидрохлорида. Раствор готовят перед употреблением.

Вариант 2

30-40 мг α-нафтола растворяют в 2,5 см³ ректификованного этилового спирта, прибавляют 7,5 см³ дистиллированной воды и растворяют 40-60 мг диметил-п-фенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением.

Вариант 3

Используют готовые индикаторные системы «СИБ-оксидаза».

Проведение анализа

Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачива­ют 2-3 каплями реактива для оксидазного теста. Готовые бумажные системы смачи­вают дистиллированной водой. Часть изолированной колонии стеклянной палочкой или платиновой петлей (металлическая петля из нихрома может дать ложноположи­тельную реакцию) наносят штрихом на подготовленную фильтровальную бумагу. Реакция считается положительной, если в течение 1 мин появляется фиолетово­коричневое (вариант 1) или синее (варианты 2 и 3) окрашивание штриха.

Обработка результатов

Микроорганизмы, давшие положительную реакцию, считаются оксидазополо- жительными.