О степени изменения крахмала в процессе приготовления теста и выпечки хлеба можно судить по распределению его фракций на бумаге в процессе элюирования их из растворов разными растворителями (йодной водой, 0,2 н. раствором гидроксида натрия или раствором перхлорной кислоты).
Для проведения анализа слабощелочной раствор исследуемых полисахаридов наносят на полоску фильтровальной бумаги, быстро погружая ее конец в раствор. Затем еще влажную бумагу подвешивают в колбе с раствором — элюэнтом. При этом благодаря капиллярным свойствам бумаги раствор поднимается вверх, а крахмальные полисахариды распределяются на бумаге в соответствии со степенью их полимеризации, молекулярной массой, химическим составом и строением. Полученные хроматограммы проявляют в 0,0005 н. растворе йода.
Техника определения следующая. Вырезают полоску хроматографической бумаги размером 2 X 13 см и расчерчивают ее карандашом по длине. Начиная с нижнего конца, делают отметки 1,5; 2,5 и 5,5 см. На дно конической колбочки вместимостью 100 мл, снабженной притертой пробкой, наливают около 10 мл растворителя-элюэнта.
Испытуемый раствор приготовляют из расчета, чтобы в нем концентрация крахмала составляла 0,1 %. Для амилопектина, амилазы и продуктов разложения крахмала она не должна превышать соответственно 0,08; 0,02 и 0,25%. Для этого около 0,5 г теста или хлеба тщательно растирают в небольшой фарфоровой ступке с 1 мл воды, добавляют 1 мл 20 н. раствора гидроксида натрия и после тщательного перемешивания объем раствора доводят до 100 мл дистил- лиров энной водой.
Ра створ полисахаридов наносят на полоску хроматографической бумаги в конической колбе вместимостью 100 мл с притертой пробкой. Для этого полоску бумаги располагают так, чтобы ее нижний конец едва касался поверхности раствора. Верхний конец фиксируют на горлышке колбы пробкой. Когда жидкость поднимается до начальной отметки (1,5 см), полоску.извлекают из раствора, но оставляют в этой же колбе, пока фронт жидкости не достигнет отметки 2,5 см.
Затем полоску бумаги переносят в колбу с растворите, лем, укрепляют ее аналогично предыдущему и оставляют дотех пор, пока фронт жидкости не поднимется до конечной отметки (5,5 cm)i Влажную хроматограмму раскладывают на стекле и проявляют водным раствором йода. При окраске хроматограмм сильно гидролизованных полисахаридов, во избежание размывания, для проявления пользуются спиртовым раствором йода.
По цвету стационарной и подвижной зон хроматограммы судят о составе полисахаридов.
Оценка хроматограмм крахмальных полисахаридов, полученных с различными растворителями на основе окраски йодполисахаридных комплексов, приведена ниже.
Реактивы: 1. 2 н. раствор гидроксида натрия. 2. 0,2 н. раствор гидроксида натрия. 3. Йодная вода (воду насыщают йодом при комнатной температуре). 4. 0,0005 н. раствор йода в йодистом калии получают разбавлением 0,1 и. раствора йода.