Метод основан на образовании синего окрашивания с парадиметиламинобензальдегидом в присутствии жела­тина.

Техника определения следующая. Около 100 мг муки или 200 мг воздушно-сухого тонко измельченного хлеба помещают в пробирку вместимостью 40 мл, смачивают 2 мл дистиллированной воды и перемешивают до исчезно­вения комочков. Добавляют 1 мл гидролизата желатина, тщательно перемешивают, закрывают пробкой и помещают в термостат при 40° С на 18—20 ч для гидролиза.

По окончании гидролиза в пробирку последовательно при тщательном перемешивании добавляют по 0,5 мл 2,5%-ного раствора парадиметиламинобензальдегида в 10%-ном растворе H₂S0₄ или НСl. Затем приливают 0,5мл 1%-ного раствора NaN0₃ и 28 мл крепкой НСl плотно­стью 1190 кг/м³. Закрытые пробками пробирки выдержи­вают в термостате при 40° С в течение 40 мин для созрева­ния синего окрашивания.

Объем содержимого пробирок доводят до 40 мл 50%-ным этанолом, закрывают пробками и после перемешивания фильтруют через плотный фильтр (синяя лента) под вытяж­ным шкафом.

Оптическую плотность испытуемого раствора опреде­ляют на фотоэлектроколориметре в кюветах с длиной рабочей грани 10 мм при красном светофильтре.

Для вычислений пользуются калибровочной кривой, которую строят по химически чистому триптофану. Для этого навеску триптофана 50 мг помещают в мерную колбу вместимостью 50мл и растворяют в 50%-ном этаноле, до­бавляя 1 каплю 1 н. раствора гидроксида калия, затем содержимое колбы доводят до метки этанолом. В этом раст­воре концентрация триптофана составляет 1 мг в 1 мл.

Для построения калибровочной кривой в 10 пробирок вместимостью 10 мл вносят по 2 мл дистиллированной во­ды, по 1 мл гидролизата желатина и оставляют на 8—10 ч при 40° С. Затем в пробирку при перемешивании после­довательно вносят по 0,5 мл парадиметиламинобензальде- гида, 0,5 мл 1%-ного раствора NaN0₃ 28 мл концентриро­ванной НСl, а затем в возрастающем количестве добавляют стандартный раствор триптофана: 0,05; 0,1; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30; 0,35; 0,40; 0,45 и 0,50 мл. Это соответствует со­держанию триптофана в пробирках 0,05 —0,50 мг. В даль­нейшем с пробами поступают так же, как и при проведении опыта. По полученным данным строят график в координа­тах «Оптическая плотность— концентрация триптофана, мг» и вычерчивают калибровочную кривую.

При навеске испытуемой муки в 100 мг количество трип­тофана X, 10^-3%, составит 1000а (здесь а —количество триптофана, найденное по калибровочной кривой, мг).

Реактивы. 1. Гидролизат желатина — 40 мг желатина на 1 мл 25%-ного раствора гидроксида калия. 2. 2,5%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида в 10%-ном раст­воре H₂S0₄ или НСl. 3. 1 % -ный раствор NaN0₃. 4. Соляная кислота плотностью 1190. 5. 40%-ный этиловый спирт. 6. Триптофан.