Для количественного определения метионина применяют колориметрический метод Гесса и Сэльвана, в котором использована цветная реакция между метионином и нитропруссидом натрия. Ниже приводится методика определения, отработанная А. Н. Савицким.
В пробирку с суженным горлышком вместимостью 20 мл помещают 0,5 г воздушно-сухого хлеба, добавляют 5мл 20%-ного раствора НСl и осторожно перемешивают, встряхивая несколько минут. Затем пробирку запаивают. Гидролиз проводят при 120° С на протяжении 18 ч.
После охлаждения содержимое пробирки нейтрализуют, добавляя по каплям 5 н. раствор гидроксида натрия до pH 4—5 (по индикаторной бумаге). К нейтрализованному гидролизату добавляют 350—500 мг активированного угля марки А, пробирку несколько минут встряхивают, после чего погружают в кипящую водяную баню на 10 мин, продолжая периодически ее встряхивать. Затем содержимое пробирки охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл. Фильтр промывают дистиллированной водой до 50 мл. Из общего объема бесцветного гидролизата отбирают 4 мл для количественного определения метионина.
К 4 мл гидролизата добавляют 1 мл свежеприготовленного 1%-ного раствора глицина и 0,2 мл 10%-ного раствора нитропруссида натрия, перемешивают и выдерживают в течение 10 мин при 35° С, после чего охлаждают на льду. Затем добавляют 2,5 мл 20%-ного раствора НСl и после энергичного встряхивания в течение 2—3 мин измеряют оптическую плотность окрашенного раствора на спектро-фотометре СФ-4 или СФ-16 при длине волны 510 нм.
Для расчетов пользуются калибровочным графиком, построенным по данным определений с химически чистым , метионином. Расчет аналогичен расчету триптофана.
Реактивы. 1. 20%-ный раствор НСl. 2. 5 н. раствор гидроксида натрия. 3. Активированный уголь марки А. 4. 1%-ный раствор глицина. 5. 10%-ный раствор нитропруссида натрия.
